動物臟器組織樣本結(jié)構(gòu)復雜,直接檢測容易因組織不均勻影響實驗結(jié)果。通過研磨處理,可以充分破壞組織結(jié)構(gòu),促進細胞內(nèi)容物釋放,提高樣品均一性,為DNA/RNA提取、蛋白分析以及毒理指標檢測提供穩(wěn)定可靠的樣品基礎。
動物組織樣本通常含有較多水分及活性成分,普通研磨容易產(chǎn)生熱量,導致樣品狀態(tài)變化。上海凈信JXCL-3K三維冷凍研磨儀采用低溫冷凍研磨方式,通過液氮環(huán)境降低樣品溫度,能夠使組織快速脆化,再進行機械破碎,可以有效減少研磨過程中的溫升減少對樣品RNA、蛋白質(zhì)等成分的影響。同時,冷凍研磨設備支持多樣品處理,可提高實驗效率和樣品處理一致性,滿足科研實驗對穩(wěn)定性的需求。

三維冷凍研磨儀對組織樣品前處理研磨的實驗操作流程
一、實驗前期準備(防RNA降解為核心)
1. 耗材預處理:使用無酶離心管、研磨珠,全程佩戴一次性手套口罩,操作臺擦拭RNase清除劑,杜絕外源核糖核酸酶污染。
2. 標本處理:將動物臟器、毒理組織樣本剪成小塊,投入液氮中冷凍鎖存核酸活性;將凍好樣本裝入無酶研磨管,加入適配規(guī)格氧化鋯研磨珠,注入TRIzol裂解液,擰緊管蓋密封。
3. 設備調(diào)試:開啟JXCL-3K三維冷凍研磨儀,設置腔體溫度預冷,等待設備溫度穩(wěn)定;整理耗材,備好液氮、低溫冰盒。
二、裝樣上機
1. 將裝好樣本的研磨管對稱放入設備適配器,嚴格配重配平,防止研磨震動偏移損傷儀器。
2. 把適配器放入研磨腔體,閉合艙門并鎖緊卡扣,確認腔體密閉。
三、設置儀器運行的程序參數(shù)
1. 調(diào)取研磨程序:設置儀器運行所需要應用的振蕩頻率、單次研磨時長、間歇制冷時間、重復循環(huán)研磨的次數(shù);依靠三維立體振蕩充分粉碎堅硬組織。
2. 啟動設備運行,全程低溫環(huán)境抑制內(nèi)源RNA酶分解核酸,最大程度地保留完整RNA。

四、研磨后核酸粗處理
1. 程序結(jié)束泄壓開蓋,取出研磨管置于冰面靜置幾分鐘,讓組織充分裂解。
2. 按照試劑標準流程,加入氯仿震蕩分層,低溫高速離心,吸取上層水相RNA溶液移入新無酶離心管。
五、純化收集與儀器收尾
1. 配合異丙醇沉淀、無酶乙醇洗滌、干燥重溶,完成RNA提純,分裝低溫保存。
2. 清空研磨腔體、適配器,使用純水擦拭清理殘渣,烘干存放設備,完成整套實驗操作。

